Densidade celular (hemocitômetro)
Células/mL = (média·diluição·10^4) / nº quadrantes.
Células/mL
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Contagem em hemocitômetro: células/mL = média · diluição · 10⁴
O hemocitômetro de Neubauer é uma lâmina espessa que traz uma grade gravada com precisão. A distância entre lamínula e grade é de 0,1 mm e cada quadrante grande cobre 1 mm², então o volume acima de um quadrante fica fixo em 0,1 mm³ = 10⁻⁴ mL. Daí sai a fórmula padrão: células/mL = (contagem média por quadrante grande) × fator de diluição × 10⁴. Suponha que você conte 200 células nos 4 quadrantes de canto após uma diluição 1:2 em azul de tripano. A média é 50, então a densidade vale 50 · 2 · 10⁴ = 1,0 × 10⁶ células/mL. O azul de tripano diz quais células estão vivas: as mortas têm membrana comprometida e absorvem o corante, enquanto as viáveis o mantêm de fora. Muitos laboratórios hoje rodam contadores automatizados como Countess e BioRad TC20, que usam análise de imagem e devolvem a viabilidade em segundos, mas a contagem manual segue como referência padrão-ouro e é a única saída quando não há equipamento por perto.
Aplicações
Aparece na cultura de células de mamífero (linhagens CHO e HEK293 para biofármacos), na pesquisa acadêmica e translacional e no desenvolvimento de processos em biotech. A mesma contagem sustenta a produção de citocinas e interferon, a manufatura de anticorpos monoclonais, a fertilização in vitro (onde se contam espermatozoides e embriões), a hematologia e o acompanhamento da densidade microbiana durante a fermentação.
Perguntas frequentes
Por que multiplicar por 10⁴? Um quadrante grande comporta 10⁻⁴ mL. Passar de células por quadrante para células por mL significa dividir por esse volume, e dividir por 10⁻⁴ dá no mesmo que multiplicar por 10⁴.
Quantas células devo contar? Procure chegar a 100–200 células nos quadrantes que você contar. Isso mantém o erro de amostragem de Poisson abaixo de 10 %.
Conto células que tocam as linhas? Conte as que tocam as linhas superior e esquerda e deixe de fora as que tocam a inferior e a direita. Essa regra evita contar a mesma célula duas vezes entre quadrantes vizinhos.
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